Реальное время набора теста PCR вируса Monkeypox быстрое для человеческих образцов эксудата убытока сыворотки

Спецификация

ПРОЦЕДУРЫ

1. Подготовки образца
Извлечение ДНК от клинических образцов проведено согласно соответствуя требованиям и процедурам в наборе извлечения ДНК вируса. Извлеченное

ДНК можно сразу использовать для обнаружения. Если образец не обнаружен немедленно после извлечения, то он следует сохранить на -70°C для положения боевой готовности, избегая повторенных циклов замораживани-таяния.

2. Подготовка системы реакции
(1) подготовка системы: Примите вне реагент от набора, и позвольте ему растаять совершенно на комнатной температуре. Переверните смесь и центрифугу немедленно. Реакции теста n (n = количество образцов, который нужно испытать + надежное управление + отрицательный контроль + 1) подготовлены для систем реакции, соответственно, следующим образом.

(2) распределение системы реакции: Смешайте хорошо вышеуказанный буфер реакции, центрифугу, и распределите 15μL аликвотов в трубки PCR соответствующие для дневной аппаратуры PCR. (Центрифугуйте трубки PCR на 6,000rpm для 30s и перехода для того чтобы попробовать зону обработки.)

3. Загрузка образца (зона обработки образца)
Добавьте нуклеиновый кисловочный образец 10μL, отрицательный контроль и надежное управление к вышеуказанным трубкам PCR соответственно. Покройте трубки плотно и центрифугу на 6,000rpm для 10s и после этого переход к зоне амплификации PCR.
* мера предосторожности: Добавление образцов в следующем заказе
порекомендовал: образец отрицательного control-> нуклеиновый кисловочный - > надежное управление.
 

4. Амплификация PCR (зона амплификации PCR)
4,1 положите caped трубки PCR в машину в реальном времени PCR для амплификации.
4,2 установка условия цикла PCR флуоресцирования

Соберите дневные сигналы на ℃ 3:60 шага; 35s на ABI 7500, 20s для SLAN-96S/96P, пока 13s для других систем в реальном времени PCR. Полный том: 25μL.

4,3 избавление после обнаружения
Размещайте трубки PCR в загерметизированной сумке после реакции и обработайте используемые трубки как медицинские отходы.
 

5. Установки для анализа результата
Установите базис на регион перед степенной амплификацией где дневные сигналы всех образцов относительно стабилизированы (отсутствие значительных зыбкост во всех образцах); установите отправную точку (номер цикла) далеко от зыбкост сигнала на начало
участок собрания флуоресцирования; установите конечный момент (номер цикла) 1~3 цикла перед Ct первого образца для того чтобы вписать степенную амплификацию. 4~15 циклов порекомендованы.
Установите право порога над высшей точкой отрицательной кривой усиления контроля (незаконной кривой шума).
 

6. Критеря по проверки качества
До оценивать результаты образца, надежное управление и отрицательный контроль должны быть интерпретированы используя таблицу толкования ниже, и надежное управление и отрицательную кривую контроля необходимо выполнить правильно, в противном случае результат образца инвалидн.

7. Толкование результатов теста
Каналы для вируса Monkeypox, результат FAM обнаружения должны быть интерпретированы как ниже.
) позитв: ≤ 38 Ct и кривая усиления S-образный.
заподозренный b): 38 < Ct=""> 40 или нулевого ≤ 35 Ct и Ct в канале VIC для второго теста.
недостаток c): Ct > 40 или нулевое ≤ 35 Ct и Ct в канале VIC.
d) испытывает повторно: Ct > 40 или нулевой Ct и Ct > 35 в канале VIC.