Add to Cart
Человеческий высокий чувствительный усиливающий агент соединителя
набора КНКСР1 ЭЛИСА усмирителя киназы Рас 1 набор Ассай ЭЛИСА
Кат.Но е6627Ху
Меры предосторожности
Точность
Точность Интра-Ассай (точность в пределах ассай) 3 образца
известной концентрации была испытани по одна плита для того чтобы
определить точность интра-ассай.
Точность Интер-Ассай (точность между ассайс) 3 образца известной
концентрации была испытана в отдельных ассайс для того чтобы
определить точность интер-ассай.
КВ (%) = СД/меан кс 100
Интра-Ассай: КВ<8>
Интер-Ассай: КВ<10>
Принцип Ассай
Этот набор сэндвича ЭЛИСА Энзим-соединенный Ассай иммуносорбента
(ЭЛИСА). Плита былапокрыта с человеческим антителом КНКСР1. КНКСР1
представляют в образце добавлены и связывают к антителам покрытым
на колодцах. И после этого биотинылатед человеческое антитело
КНКСР1 добавлено и связывает к КНКСР1 в образце. После этого
Стрептавидин-ХРП добавлено и связывает к антителу Биотинылатед
КНКСР1. После инкубации унбоунд Стрептавидин-ХРП помыто прочь во
время моя шага. Решение субстрата после этого добавлено и цвет
превращается в пропорции к количеству человеческого КНКСР1. Реакция
прекращена добавлением кислотного останавливает решение и
абсорбансе измерен на 450 нм.
Предполагаемое использование
Этот набор сэндвича для точного количественного обнаружения
человеческого усиливающего агента соединителя усмирителя киназы Рас
1 (также известного как КНКСР1) в сыворотке, плазме, супернатес
культуры клетки, лысатес клетки, гомогенатах ткани.
Обеспеченный реагент
Компоненты | Количество |
Стандартное решение (1600нг/Л) | 0.5мл кс1 |
Пре-покрытая плита ЭЛИСА | 12 * 8 хороших прокладки кс1 |
Стандартный разжижитель | 3мл кс1 |
Стрептавидин-ХРП | 6мл кс1 |
Остановите решение | 6мл кс1 |
Решение а субстрата | 6мл кс1 |
Решение б субстрата | 6мл кс1 |
Концентрат буфера мытья (25кс) | 20мл кс1 |
Антитело КНКСР1 Биотинылатед человеческое | 1мл кс1 |
Инструкция потребителя | 1 |
Уплотнитель плиты | пикс 2 |
Сумка молнии | 1 пик |
Собрание образца
Сыворотка позволяет сыворотке свернуться на 10-20 минут на комнатной
температуре. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на 20 минут.
Плазма собирает плазму используя ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ или гепарин как
противокоагулятор. Центрифугуйте образцы на 15 минут на 2000-3000
РПМ на 2 - 8°К не позднее 30 минут собрания.
Моча собирает стерильной трубкой. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на
приблизительно 20 минут. Собирая плеуроперитонеал жидкую и
спинномозговую жидкость, пожалуйста следовать процедурами
вышеупомянутыми.
Супернатант культуры клетки собирает стерильными трубками рассматривая сделайте компоненты
секретным. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20
минут. Соберите супернатанц осторожно. Рассматривая компоненты
внутри клетка, используйте ПБС (пэ-аш 7.2-7.4) для того чтобы
разбавить подвес клетки к концентрации клетки приблизительно 1
миллион/мл. Повредите клетки через повторенные циклы
замораживани-таяния для того чтобы позволить вне внутренним
компонентам. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20
минут.
Ткань и другие содержащие в теле жидкости полощут ткани в ПБС (пэ-аш 7,4) для того чтобы извлечь сверхнормальную кровь тщательно и весить перед
гомогенизацией. Семените ткани и гомогенизируйте их в ПБС (пХ7.4) с
стеклянным гомогенизатором на льде. Растайте на 2-8°К или
замерзните на центрифуге -20°К. на 2000-3000 РПМ на приблизительно
20 минут.
*Сампле нельзя разбавить с этим набором. Вследствие материала мы
используем для подготовки набора, взаимодействие матрицы образца
может ложно отжать характерность и точность ассай.
Процедура по Ассай
1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как
проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре
перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.
2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в
рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на
2-8°К.
3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное
решение содержит биотинылатед антитело.
4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте
антитело 10μл анти-КНКСР1 к колодцам образца, тогда добавьте
стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам
(колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с
уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.
5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья.
Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30
секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной
стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья,
переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные
полотенца или другой абсорбент материал.
6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого
добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте
плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.
7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет
изменит в желтый цвет немедленно.
8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец
немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10
менуэтов после добавления решения стопа.