

Add to Cart
Человеческий высокий набор теста Иммуноассайс чувствительности и
характерности АРХГЭФ1 для точного количественного обнаружения
Кат.Но е3234Ху
Стандартный ряд кривой: 5нг/Л - 1000нг/Л
Чувствительность: 2.79нг/Л
Предполагаемое использование
Этот набор сэндвича для точного количественного обнаружения
человеческого фактора 1 обменом нуклеотида гуанина Рхо (также
известного как АРХГЭФ1) в сыворотке, плазме, супернатес культуры
клетки, лысатес клетки, гомогенатах ткани.
Собрание образца
Сыворотка позволяет сыворотке свернуться на 10-20 минут на комнатной
температуре. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на 20 минут.
Плазма собирает плазму используя ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ или гепарин как
противокоагулятор. Центрифугуйте образцы на 15 минут на 2000-3000
РПМ на 2 - 8°К не позднее 30 минут собрания.
Моча собирает стерильной трубкой. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на
приблизительно 20 минут. Собирая плеуроперитонеал жидкую и
спинномозговую жидкость, пожалуйста следовать процедурами
вышеупомянутыми.
Супернатант культуры клетки собирает стерильными трубками рассматривая сделайте компоненты
секретным. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20
минут. Соберите супернатанц осторожно. Рассматривая компоненты
внутри клетка, используйте ПБС (пэ-аш 7.2-7.4) для того чтобы
разбавить подвес клетки к концентрации клетки приблизительно 1
миллион/мл. Повредите клетки через повторенные циклы
замораживани-таяния для того чтобы позволить вне внутренним
компонентам. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20
минут.
Ткань другие содержащие в теле жидкости полощет ткани в ПБС (пэ-аш 7,4) для того чтобы извлечь сверхнормальную кровь тщательно и весить перед
гомогенизацией. Семените ткани и гомогенизируйте их в ПБС (пХ7.4) с
стеклянным гомогенизатором на льде. Растайте на 2-8°К или
замерзните на центрифуге -20°К. на 2000-3000 РПМ на приблизительно
20 минут.
Заметьте
*Сампле нельзя разбавить с этим набором. Вследствие материала мы
используем для подготовки набора, взаимодействие матрицы образца
может ложно отжать характерность и точность ассай.
Подготовка реагента
Все реагенты должны быть принесены к комнатной температуре перед
использованием.
Стандарт воспроизводит 120μл стандарта (1280нг/Л) с 120μл стандартного
разжижителя для генерации запасного раствора стандарта 640нг/Л.
Позвольте стандарту сидеть на 15 минут с нежным взволнованием до
делать разбавления. Подготовьте двойные стандартные пункты серийно
разбавлять 1:2 стандартного запасного раствора (640нг/Л) с
стандартным разжижителем для произведения решений 320нг/Л, 160нг/Л,
80нг/Л и 40нг/Л. Стандартный разжижитель служит как зеро стандарт
(0 нг/Л). Любое остальное решение должно замерзнуться на -20°К и
использоваться не позднее один месяц. Разбавление стандартных
предложенных решений следующим образом:
640нг/Л | Стандартное Но.5 | первоначальный разжижитель стандарта 120μл + стандарта 120μл |
320нг/Л | Стандартное Но.4 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.5 + 120μл |
160нг/Л | Стандартное Но.3 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.4 + 120μл |
80нг/Л | Стандартное Но.2 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.3 + 120μл |
40нг/Л | Стандартное Но.1 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.2 + 120μл |
Стандартная концентрация | Стандартное Но.5 | Стандартное Но.4 | Стандартное Но.3 | Стандартное Но.2 | Стандартное Но.1 |
1280нг/Л | 640нг/Л | 320нг/Л | 160нг/Л | 80нг/Л | 40нг/Л |
Мытье 20мл разбавленное буфером концентрата 25кс буфера мытья в деионизированный или
дистиллированная вода для того чтобы произвести 500 мл буфера мытья 1кс. Если кристаллы формировали в
концентрате, то смешивание нежно до тех пор пока кристаллы
совершенно не растворят.
Процедура по Ассай
1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как
проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре
перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.
2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в
рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на
2-8°К.
3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное
решение содержит биотинылатед антитело.
4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте
антитело 10μл анти-АРХГЭФ1 к колодцам образца, тогда добавьте
стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам
(колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с
уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.
5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья.
Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30
секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной
стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья,
переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные
полотенца или другой абсорбент материал.
6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого
добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте
плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.
7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет
изменит в желтый цвет немедленно.
8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец
немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10
менуэтов после добавления решения стопа.