Протокол испытаний ELISA
Ориентировочно на каждой полоске, которая будет использоваться, и на аликвоте реагентов следует следующий пример:
| Компонент |
Объем на реакцию |
24 Реакции |
| Антитело к канамицину # 1 |
50 л |
1.2мл |
| HRP-конъюгированный Ab #2 |
50 л |
1.2мл |
| 1 X раствор для промывки |
10,0 мл |
24 мл |
| Останови буфер |
100 л |
2.4 мл |
| ТМБ субстрат |
100 л |
2.4 мл |
- Добавьте по 50 л каждая канамициновая стандартка в двух экземплярах в разные колодцы (добавьте стандарты в тарелку только в порядке от низкой концентрации до высокой концентрации).
- Добавьте по 50 л каждого образца в двух экземплярах в разные пробирки.
- Добавьте 50 л HRP-конъюгированного Ab # 2 в каждую скважину и 50 л канамицин антитела # 1 в каждую скважину.
- Инкубируйте тарелку в течение 30 минут при комнатной температуре (20 25°C / 68 77°F).Во время инкубации избегайте прямых солнечных лучей и холодных столов.)).
- После последней стирки переверните тарелку и нежно нажмите на бумажные полотенца, чтобы высушить тарелку (Проведите следующий шаг сразу после мытья тарелок.Не допускайте сушки пластины между рабочими этапами).
- Добавьте 100 мл субстрата ТМБ. Время реакции сразу после добавления субстрата. Смешайте раствор, мягко качая пластину вручную в течение 30 секунд во время инкубации.Не помещайте субстрат обратно в исходный контейнер, чтобы избежать возможного загрязнения.Рекомендуется закрывать микротитерную пластину во время инкубации)).
- После 15 минут инкубации при комнатной температуре (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F), добавить 100 л Stop Buffer, чтобы остановить реакцию фермента.
- Читайте табличку как можно скорее после добавления "Стоп-буфера" на читателе табличек с длиной волны 450 нм (Прежде чем читать,Используйте на нижней части пластинки безнадёжный салфетку, чтобы не допустить помех влаги или отпечатков пальцев).
