CO. Шанхая Korain Biotech, Ltd
Shanghai Korain Biotech Co Ltd
Add to Cart
Точность мыши 96 Велльс высокая и чувствительный набор Ресистин ЭЛИСА
Кат.Но е0263Мо
Стандартный ряд кривой: 0.3нг/мл - 90нг/мл
Чувствительность: 0.13нг/мл
Предполагаемое использование
Этот набор сэндвича для точного количественного обнаружения мыши Несфатин1 (также известного как Ретн) в сыворотке, плазме, супернатес культуры клетки, лысатес клетки, гомогенатах ткани.
Принцип Ассай
Этот набор Энзим-соединенный Ассай иммуносорбента (ЭЛИСА). Плита былапокрыта с антителом Ретн мыши. Ретн представляет в образце добавлено и связывает к антителам покрытым на колодцах. И после этого биотинылатед антитело Ретн мыши добавлено и связывает к Ретн в образце. После этого Стрептавидин-ХРП добавлено и связывает к антителу Биотинылатед Ретн. После инкубации унбоунд Стрептавидин-ХРП помыто прочь во время моя шага. Решение субстрата после этого добавлено и цвет превращается в пропорции к количеству мыши Ретн. Реакция прекращена добавлением кислотного останавливает решение и абсорбансе измерен на 450 нм.
Обеспеченный реагент
| Компоненты | Количество |
| Стандартное решение (96нг/мл) | 0.5мл кс1 |
| Пре-покрытая плита ЭЛИСА | 12 * 8 хороших прокладки кс1 |
| Стандартный разжижитель | 3мл кс1 |
| Стрептавидин-ХРП | 6мл кс1 |
| Остановите решение | 6мл кс1 |
| Решение а субстрата | 6мл кс1 |
| Решение б субстрата | 6мл кс1 |
| Концентрат буфера мытья (30кс) | 20мл кс1 |
| Антитело Ретн мыши Биотинылатед | 1мл кс1 |
| Инструкция потребителя | 1 |
| Уплотнитель плиты | пикс 2 |
| Сумка молнии | 1 пик |
Собрание образца
Сыворотка позволяет сыворотке свернуться на 10-20 минут на комнатной температуре. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на 20 минут.
Плазма собирает плазму используя ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ или гепарин как противокоагулятор. Центрифугуйте образцы на 15 минут на 2000-3000 РПМ на 2 - 8°К не позднее 30 минут собрания.
Моча собирает стерильной трубкой. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Собирая плеуроперитонеал жидкую и спинномозговую жидкость, пожалуйста следовать процедурами вышеупомянутыми.
Супернатант культуры клетки собирает стерильными трубками рассматривая сделайте компоненты секретным. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Соберите супернатанц осторожно. Рассматривая компоненты внутри клетка, используйте ПБС (пэ-аш 7.2-7.4) для того чтобы разбавить подвес клетки к концентрации клетки приблизительно 1 миллион/мл. Повредите клетки через повторенные циклы замораживани-таяния для того чтобы позволить вне внутренним компонентам. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.
Ткани Ринсе ткани в ПБС (пэ-аш 7,4) для того чтобы извлечь сверхнормальную кровь тщательно и весить перед гомогенизацией. Семените ткани и гомогенизируйте их в ПБС (пХ7.4) с стеклянным гомогенизатором на льде. Растайте на 2-8°К или замерзните на центрифуге -20°К. на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.
*Сампле нельзя разбавить с этим набором. Вследствие материала мы используем для подготовки набора, взаимодействие матрицы образца может ложно отжать характерность и точность ассай.
Процедура по Ассай
1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.
2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на 2-8°К.
3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное решение содержит биотинылатед антитело.
4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте анти--Ретн антитело 10μл к колодцам образца, тогда добавьте стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам (колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.
5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья. Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30 секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья, переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные полотенца или другой абсорбент материал.
6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.
7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет изменит в желтый цвет немедленно.
8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10 менуэтов после добавления решения стопа.
Вычисление результата
Построьте стандартную кривую путем прокладка курса среднего ОД для каждого стандартного на вертикальной оси (ы) против концентрации на горизонтальной (кс) оси и нарисуйте наиболее пригодную кривую через пункты на диаграмме. Эти вычисления можно наиболее хорошо выполнить с машинным программным обеспечением подбора кривой и наиболее пригодная линия может быть определена регрессионным анализом.