НАБОР фактора роста 2 ЭЛИСА фиброцита мыши чувствительности с антителом мыши ФГФ 2

Колодцы НАБОРА 96 чувствительности и фактора роста 2 ЭЛИСА фиброцита мыши характерности

Кат.Но Э1592Мо

Стандартный ряд кривой: 3нг/Л - 900нг/Л

Чувствительность: 0.14нг/Л

Размер: 96 колодцев

Хранение: Храните реагенты на 2-8°К. для хранения сверх 6 месяцев сошлитесь на срок годности держите его на циклах таяния -20°К. Авоид повторенных. Если индивидуальные реагенты раскрыты, то порекомендовано, чтобы набор был использован не позднее 1 месяц.

* этот продукт для пользы исследования только, не для пользы в процедурах по диагноза. Он сильно рекомендует прочитать эту инструкцию полностью перед использованием.

Предполагаемое использование

Этот набор сэндвича для точного количественного обнаружения фактора роста 2 фиброцита мыши (также известного как ФГФ-2) в сыворотке, плазме, супернатес культуры клетки, лысатес клетки, гомогенатах ткани.

Принцип Ассай

Этот набор Энзим-соединенный Ассай иммуносорбента (ЭЛИСА). Плита былапокрыта с антителом мыши ФГФ-2. ФГФ-2 представляют в образце добавлены и связывают к антителам покрытым на колодцах. И после этого биотинылатед антитело мыши ФГФ-2 добавлено и связывает к ФГФ-2 в образце. После этого Стрептавидин-ХРП добавлено и связывает к антителу Биотинылатед ФГФ-2. После инкубации унбоунд Стрептавидин-ХРП помыто прочь во время моя шага. Решение субстрата после этого добавлено и цвет превращается в пропорции к количеству мыши ФГФ-2. Реакция прекращена добавлением кислотного останавливает решение и абсорбансе измерен на 450 нм.

Собрание образца

Сыворотка позволяет сыворотке свернуться на 10-20 минут на комнатной температуре. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на 20 минут.

Плазма собирает плазму используя ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ или гепарин как противокоагулятор. Центрифугуйте образцы на 15 минут на 2000-3000 РПМ на 2 - 8°К не позднее 30 минут собрания.

Моча собирает стерильной трубкой. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Собирая плеуроперитонеал жидкую и спинномозговую жидкость, пожалуйста следовать процедурами вышеупомянутыми.

Супернатант культуры клетки собирает стерильными трубками рассматривая сделайте компоненты секретным. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Соберите супернатанц осторожно. Рассматривая компоненты внутри клетка, используйте ПБС (пэ-аш 7.2-7.4) для того чтобы разбавить подвес клетки к концентрации клетки приблизительно 1 миллион/мл. Повредите клетки через повторенные циклы замораживани-таяния для того чтобы позволить вне внутренним компонентам. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.

Ткани Ринсе ткани в ПБС (пэ-аш 7,4) для того чтобы извлечь сверхнормальную кровь тщательно и весить перед гомогенизацией. Семените ткани и гомогенизируйте их в ПБС (пХ7.4) с стеклянным гомогенизатором на льде. Растайте на 2-8°К или замерзните на центрифуге -20°К. на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.

Заметьте

• Концентрация образца должна быть предсказана перед быть использованным в ассай. Если концентрация образца нет внутри ряд стандартной кривой, то потребители должны связаться мы для того чтобы определить оптимальный образец для их определенных экспериментов.
• Образцы, который нужно использовать в течение 5 дней следует сохранить на образцах 2-8°К. должны быть аликвотед или должны храниться на -20°К не позднее 1 месяц или -80°К не позднее 6 месяцев. Авоид повторило циклы таяния замораживания.
• Образцы должны быть принесены к комнатной температуре перед началом ассай.
• Центрифуга для того чтобы собрать образец перед использованием.
• Образцы содержа НаН3 нельзя испытать по мере того как оно блокирует работу пероксидазы (HRP) редиски лошади.
• Соберите супернатанц осторожно. Когда седименты произошли во время хранения, центрифугирование должно быть выполнено снова.
• Хемолысис может значительно плотно сжать ценность результатов теста. Позаботьтесь для того чтобы уменьшить хэмолысис.

*Сампле нельзя разбавить с этим набором. Вследствие материала мы используем для подготовки набора, взаимодействие матрицы образца может ложно отжать характерность и точность ассай.

Процедура по Ассай

1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.

2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на 2-8°К.

3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное решение содержит биотинылатед антитело.

4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте антитело 10μл анти-ФГФ-2 к колодцам образца, тогда добавьте стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам (колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.

5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья. Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30 секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья, переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные полотенца или другой абсорбент материал.

6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.

7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет изменит в желтый цвет немедленно.

8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10 менуэтов после добавления решения стопа.

Вычисление результата

Построьте стандартную кривую путем прокладка курса среднего ОД для каждого стандартного на вертикальной оси (ы) против концентрации на горизонтальной (кс) оси и нарисуйте наиболее пригодную кривую через пункты на диаграмме. Эти вычисления можно наиболее хорошо выполнить с машинным программным обеспечением подбора кривой и наиболее пригодная линия может быть определена регрессионным анализом.

Ссылки

Х. Ямада, Ямада Э., Н. Квак, А. Андо, А. Сузуки, Н. Эсуми, Зак Д.ДЖ., Кампочяро П.А.
Дж. Клетка. Фысиол. 185:135- 142(2000)