Человеческий высокий чувствительный тситохром П450 1А2 набора Ассай Элиса подгонял КИП1А2

Человеческий высокий чувствительный набор сэндвича ЭЛИСА тситохрома П450 1А2 подгонял набор КИП1А2 ЭЛИСА

Кат.Но е2281Ху

Стандартный ряд кривой: 10нг/Л - 2000нг/Л

Чувствительность: 5.15нг/Л

Хранение: Храните реагенты на 2-8°К. для хранения сверх 6 месяцев сошлитесь на срок годности держите его на циклах таяния -20°К. Авоид повторенных. Если индивидуальные реагенты раскрыты, то порекомендовано, чтобы набор был использован не позднее 1 месяц.

продукт *Тхис для пользы исследования только, не для пользы в процедурах по диагноза. Он сильно рекомендует прочитать эту инструкцию полностью перед использованием.

Процедура по Ассай

1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.

2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на 2-8°К.

3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное решение содержит биотинылатед антитело.

4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте антитело 10μл анти-КИП1А2 к колодцам образца, тогда добавьте стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам (колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.

5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья. Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30 секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья, переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные полотенца или другой абсорбент материал.

6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.

7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет изменит в желтый цвет немедленно.

8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10 менуэтов после добавления решения стопа.

Сводка

1. Подготовьте все реагенты, образцы и стандарты.

2. Добавьте образец и реагент ЭЛИСА в каждое хорошо. Инкубируйте на 1 час на 37°К.

3. Помойте плиту 5 раз.

4. Добавьте решение а и Б. Инкубировать субстрата на 10 минут на 37°К.

5. Добавьте остановите решение и цвет превращается.

6. Прочитайте значение ОД не позднее 10 минут.

Точность

Точность Интра-Ассай (точность в пределах ассай) 3 образца известной концентрации была испытани по одна плита для того чтобы определить точность интра-ассай.

Точность Интер-Ассай (точность между ассайс) 3 образца известной концентрации была испытана в отдельных ассайс для того чтобы определить точность интер-ассай.

КВ (%) = СД/меан кс 100

Интра-Ассай: КВ<8>

Интер-Ассай: КВ<10>

Принцип Ассай

Этот набор елиса сэндвича Энзим-соединенный Ассай иммуносорбента (ЭЛИСА). Плита былапокрыта с человеческим антителом КИП1А2. КИП1А2 представляют в образце добавлены и связывают к антителам покрытым на колодцах. И после этого биотинылатед человеческое антитело КИП1А2 добавлено и связывает к КИП1А2 в образце. После этого Стрептавидин-ХРП добавлено и связывает к антителу Биотинылатед КИП1А2. После инкубации унбоунд Стрептавидин-ХРП помыто прочь во время моя шага. Решение субстрата после этого добавлено и цвет превращается в пропорции к количеству человеческого КИП1А2. Реакция прекращена добавлением кислотного останавливает решение и абсорбансе измерен на 450 нм.

Подготовка реагента

Все реагенты должны быть принесены к комнатной температуре перед использованием.

Стандарт воспроизводит 120μл стандарта (2400нг/Л) с 120μл стандартного разжижителя для генерации запасного раствора стандарта 1200нг/Л. Позвольте стандарту сидеть на 15 минут с нежным взволнованием до делать разбавления. Подготовьте двойные стандартные пункты серийно разбавлять 1:2 стандартного запасного раствора (1200нг/Л) с стандартным разжижителем для произведения решений 600нг/Л, 300нг/Л, 150нг/Л и 75нг/Л. Стандартный разжижитель служит как зеро стандарт (0 нг/Л). Любое остальное решение должно замерзнуться на -20°К и использоваться не позднее один месяц. Разбавление стандартных предложенных решений следующим образом:

Мытье 20мл разбавленное буфером концентрата 25кс буфера мытья в деионизированный или дистиллированная вода для того чтобы произвести 500 мл буфера мытья 1кс. Если кристаллы формировали в концентрате, то смешивание нежно до тех пор пока кристаллы совершенно не растворят.

Вычисление результата

Построьте стандартную кривую путем прокладка курса среднего ОД для каждого стандартного на вертикальной оси (ы) против концентрации на горизонтальной (кс) оси и нарисуйте наиболее пригодную кривую через пункты на диаграмме. Эти вычисления можно наиболее хорошо выполнить с машинным программным обеспечением подбора кривой и наиболее пригодная линия может быть определена регрессионным анализом.