Высокий чувствительный усиливающий агент соединителя набора КНКСР1 ЭЛИСА усмирителя киназы Рас 1

Человеческий высокий чувствительный усиливающий агент соединителя набора КНКСР1 ЭЛИСА усмирителя киназы Рас 1 набор Ассай ЭЛИСА
 
Кат.Но е6627Ху
 
Меры предосторожности

• До пользы, набор и образец сэндвича ЭЛИСА следует греть естественно к комнатной температуре 30 минут.
• Этой инструкцией необходимо строго следовать в эксперименте.
• Раз пожеланное число прокладок извлекалось, немедленно заново герметизирует сумку для защиты оставать от ухудшения качества. Покройте все реагенты когда не в пользе.
• Маке суре капая заказ и тариф из пипетки добавления от хорошо к хорошо капая реагенты из пипетки.
• Пипетка наклоняет и уплотнитель плиты в руке должен быть чист и устраним избежать взаимн загрязнения.
• Избегите использовать реагенты от различных серий совместно.
• Решение б субстрата чувствительно к свету, не подвергает решение действию б субстрата для того чтобы осветить в течение длительного времени.
• Остановите решение содержит кислоту. Пожалуйста несите предохранение от глаза, руки и кожи при использовании этого материала. Избегите контакта кожи или слизистых мембран с реагентом набора.
• Набор не должен быть использован за сроком годности.

 
Точность
Точность Интра-Ассай (точность в пределах ассай) 3 образца известной концентрации была испытани по одна плита для того чтобы определить точность интра-ассай.
Точность Интер-Ассай (точность между ассайс) 3 образца известной концентрации была испытана в отдельных ассайс для того чтобы определить точность интер-ассай.
КВ (%) = СД/меан кс 100
Интра-Ассай: КВ<8>
Интер-Ассай: КВ<10>
 
Принцип Ассай
Этот набор сэндвича ЭЛИСА Энзим-соединенный Ассай иммуносорбента (ЭЛИСА). Плита былапокрыта с человеческим антителом КНКСР1. КНКСР1 представляют в образце добавлены и связывают к антителам покрытым на колодцах. И после этого биотинылатед человеческое антитело КНКСР1 добавлено и связывает к КНКСР1 в образце. После этого Стрептавидин-ХРП добавлено и связывает к антителу Биотинылатед КНКСР1. После инкубации унбоунд Стрептавидин-ХРП помыто прочь во время моя шага. Решение субстрата после этого добавлено и цвет превращается в пропорции к количеству человеческого КНКСР1. Реакция прекращена добавлением кислотного останавливает решение и абсорбансе измерен на 450 нм.
 
Предполагаемое использование
Этот набор сэндвича для точного количественного обнаружения человеческого усиливающего агента соединителя усмирителя киназы Рас 1 (также известного как КНКСР1) в сыворотке, плазме, супернатес культуры клетки, лысатес клетки, гомогенатах ткани.
 
Обеспеченный реагент

 
 
Собрание образца
Сыворотка позволяет сыворотке свернуться на 10-20 минут на комнатной температуре. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на 20 минут.
 
Плазма собирает плазму используя ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ или гепарин как противокоагулятор. Центрифугуйте образцы на 15 минут на 2000-3000 РПМ на 2 - 8°К не позднее 30 минут собрания.
 
Моча собирает стерильной трубкой. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Собирая плеуроперитонеал жидкую и спинномозговую жидкость, пожалуйста следовать процедурами вышеупомянутыми.
 
Супернатант культуры клетки собирает стерильными трубками рассматривая сделайте компоненты секретным. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Соберите супернатанц осторожно. Рассматривая компоненты внутри клетка, используйте ПБС (пэ-аш 7.2-7.4) для того чтобы разбавить подвес клетки к концентрации клетки приблизительно 1 миллион/мл. Повредите клетки через повторенные циклы замораживани-таяния для того чтобы позволить вне внутренним компонентам. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.
 
Ткань и другие содержащие в теле жидкости полощут ткани в ПБС (пэ-аш 7,4) для того чтобы извлечь сверхнормальную кровь тщательно и весить перед гомогенизацией. Семените ткани и гомогенизируйте их в ПБС (пХ7.4) с стеклянным гомогенизатором на льде. Растайте на 2-8°К или замерзните на центрифуге -20°К. на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.
 
*Сампле нельзя разбавить с этим набором. Вследствие материала мы используем для подготовки набора, взаимодействие матрицы образца может ложно отжать характерность и точность ассай.
 
Процедура по Ассай
1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.
2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на 2-8°К.
3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное решение содержит биотинылатед антитело.
4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте антитело 10μл анти-КНКСР1 к колодцам образца, тогда добавьте стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам (колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.
5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья. Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30 секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья, переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные полотенца или другой абсорбент материал.
6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.
7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет изменит в желтый цвет немедленно.
8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10 менуэтов после добавления решения стопа.