Чувствительность набора 2.79нг/Л теста Иммуноассайс набора АРХГЭФ1 снадарта Международной организации стандартизации человеческая ЭЛИСА

Человеческий высокий набор теста Иммуноассайс чувствительности и характерности АРХГЭФ1 для точного количественного обнаружения
 
Кат.Но е3234Ху
Стандартный ряд кривой: 5нг/Л - 1000нг/Л
Чувствительность: 2.79нг/Л
 
Предполагаемое использование
Этот набор сэндвича для точного количественного обнаружения человеческого фактора 1 обменом нуклеотида гуанина Рхо (также известного как АРХГЭФ1) в сыворотке, плазме, супернатес культуры клетки, лысатес клетки, гомогенатах ткани.
 
Собрание образца
Сыворотка позволяет сыворотке свернуться на 10-20 минут на комнатной температуре. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на 20 минут.
 
Плазма собирает плазму используя ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ или гепарин как противокоагулятор. Центрифугуйте образцы на 15 минут на 2000-3000 РПМ на 2 - 8°К не позднее 30 минут собрания.
 
Моча собирает стерильной трубкой. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Собирая плеуроперитонеал жидкую и спинномозговую жидкость, пожалуйста следовать процедурами вышеупомянутыми.
 
Супернатант культуры клетки собирает стерильными трубками рассматривая сделайте компоненты секретным. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Соберите супернатанц осторожно. Рассматривая компоненты внутри клетка, используйте ПБС (пэ-аш 7.2-7.4) для того чтобы разбавить подвес клетки к концентрации клетки приблизительно 1 миллион/мл. Повредите клетки через повторенные циклы замораживани-таяния для того чтобы позволить вне внутренним компонентам. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.
 
Ткань другие содержащие в теле жидкости полощет ткани в ПБС (пэ-аш 7,4) для того чтобы извлечь сверхнормальную кровь тщательно и весить перед гомогенизацией. Семените ткани и гомогенизируйте их в ПБС (пХ7.4) с стеклянным гомогенизатором на льде. Растайте на 2-8°К или замерзните на центрифуге -20°К. на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.
 
Заметьте

• Концентрация образца должна быть предсказана перед быть использованным в ассай. Если концентрация образца нет внутри ряд стандартной кривой, то потребители должны связаться мы для того чтобы определить оптимальный образец для их определенных экспериментов.
• Образцы, который нужно использовать в течение 5 дней следует сохранить на образцах 2-8°К. должны быть аликвотед или должны храниться на -20°К не позднее 1 месяц или -80°К не позднее 6 месяцев. Авоид повторило циклы таяния замораживания.
• Образцы должны быть принесены к комнатной температуре перед началом ассай.
• Центрифуга для того чтобы собрать образец перед использованием.
• Образцы содержа НаН3 нельзя испытать по мере того как оно блокирует работу пероксидазы (HRP) редиски лошади.
• Соберите супернатанц осторожно. Когда седименты произошли во время хранения, центрифугирование должно быть выполнено снова.
• Хемолысис может значительно плотно сжать ценность результатов теста. Позаботьтесь для того чтобы уменьшить хэмолысис.

*Сампле нельзя разбавить с этим набором. Вследствие материала мы используем для подготовки набора, взаимодействие матрицы образца может ложно отжать характерность и точность ассай.
 
Подготовка реагента
Все реагенты должны быть принесены к комнатной температуре перед использованием.
Стандарт воспроизводит 120μл стандарта (1280нг/Л) с 120μл стандартного разжижителя для генерации запасного раствора стандарта 640нг/Л. Позвольте стандарту сидеть на 15 минут с нежным взволнованием до делать разбавления. Подготовьте двойные стандартные пункты серийно разбавлять 1:2 стандартного запасного раствора (640нг/Л) с стандартным разжижителем для произведения решений 320нг/Л, 160нг/Л, 80нг/Л и 40нг/Л. Стандартный разжижитель служит как зеро стандарт (0 нг/Л). Любое остальное решение должно замерзнуться на -20°К и использоваться не позднее один месяц. Разбавление стандартных предложенных решений следующим образом:
 

 
Мытье 20мл разбавленное буфером концентрата 25кс буфера мытья в деионизированный или дистиллированная вода для того чтобы произвести 500 мл буфера мытья 1кс. Если кристаллы формировали в концентрате, то смешивание нежно до тех пор пока кристаллы совершенно не растворят.
 
Процедура по Ассай
1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.
2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на 2-8°К.
3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное решение содержит биотинылатед антитело.
4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте антитело 10μл анти-АРХГЭФ1 к колодцам образца, тогда добавьте стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам (колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.
5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья. Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30 секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья, переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные полотенца или другой абсорбент материал.
6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.
7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет изменит в желтый цвет немедленно.
8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10 менуэтов после добавления решения стопа.