CO. Шанхая Korain Biotech, Ltd
Shanghai Korain Biotech Co Ltd
Add to Cart
Собачий набор Неоптерин ЭЛИСА с высоким Спесифиситы и чувствительностью
Кат.Но Э0205Ка
Предполагаемое использование
Этот набор сэндвича для точного количественного обнаружения собачьего Неоптерин (также известного как НЭОП) в сыворотке, плазме, супернатес культуры клетки, лысатес клетки, гомогенатах ткани.
Принцип Ассай
Этот набор Энзим-соединенный Ассай иммуносорбента (ЭЛИСА). Плита былапокрыта с собачьим антителом НЭОП. НЭОП представляют в образце добавлены и связывают к антителам покрытым на колодцах. И после этого биотинылатед собачье антитело НЭОП добавлено и связывает к НЭОП в образце. После этого Стрептавидин-ХРП добавлено и связывает к антителу Биотинылатед НЭОП. После инкубации унбоунд Стрептавидин-ХРП помыто прочь во время моя шага. Решение субстрата после этого добавлено и цвет превращается в пропорции к количеству собачьего НЭОП. Реакция прекращена добавлением кислотного останавливает решение и абсорбансе измерен на 450 нм.
Обеспеченный реагент
| Компоненты | Количество |
|
Стандартное решение (64нмол/Л) |
0.5мл кс1 |
| Пре-покрытая плита ЭЛИСА | 12 * 8 хороших прокладки кс1 |
| Стандартный разжижитель | 3мл кс1 |
| Стрептавидин-ХРП | 6мл кс1 |
| Остановите решение | 6мл кс1 |
| Решение а субстрата | 6мл кс1 |
| Решение б субстрата | 6мл кс1 |
| Концентрат буфера мытья (30кс) | 20мл кс1 |
| Антитело Биотинылатед собачье НЭОП | 1мл кс1 |
| Инструкция потребителя | 1 |
| Уплотнитель плиты | пикс 2 |
| Сумка молнии | 1 пик |
Собрание образца
Сыворотка позволяет сыворотке свернуться на 10-20 минут на комнатной температуре. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на 20 минут.
Плазма собирает плазму используя ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ или гепарин как противокоагулятор. Центрифугуйте образцы на 15 минут на 2000-3000 РПМ на 2 - 8°К не позднее 30 минут собрания.
Моча собирает стерильной трубкой. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Собирая плеуроперитонеал жидкую и спинномозговую жидкость, пожалуйста следовать процедурами вышеупомянутыми.
Супернатант культуры клетки собирает стерильными трубками рассматривая сделайте компоненты секретным. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Соберите супернатанц осторожно. Рассматривая компоненты внутри клетка, используйте ПБС (пэ-аш 7.2-7.4) для того чтобы разбавить подвес клетки к концентрации клетки приблизительно 1 миллион/мл. Повредите клетки через повторенные циклы замораживани-таяния для того чтобы позволить вне внутренним компонентам. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.
Ткани Ринсе ткани в ПБС (пэ-аш 7,4) для того чтобы извлечь сверхнормальную кровь тщательно и весить перед гомогенизацией. Семените ткани и гомогенизируйте их в ПБС (пХ7.4) с стеклянным гомогенизатором на льде. Растайте на 2-8°К или замерзните на центрифуге -20°К. на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.
Подготовка реагента
Все реагенты должны быть принесены к комнатной температуре перед использованием.
Стандарт воспроизводит 120μл стандарта (64нмол/Л) с 120μл стандартного разжижителя для генерации запасного раствора стандарта 32нмол/Л. Позвольте стандарту сидеть на 15 минут с нежным взволнованием до делать разбавления. Подготовьте двойные стандартные пункты серийно разбавлять 1:2 стандартного запасного раствора (32нмол/Л) с стандартным разжижителем для произведения решений 16нмол/Л, 8нмол/Л, 4нмол/Л и 2нмол/Л. Стандартный разжижитель служит как зеро стандарт (0 нмол/Л). Любое остальное решение должно замерзнуться на -20℃ и использоваться не позднее один месяц. Разбавление стандартных предложенных решений следующим образом:
| 32нмол/Л | Стандартное Но.5 | первоначальный разжижитель стандарта 120μл + стандарта 120μл |
| 16нмол/Л | Стандартное Но.4 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.5 + 120μл |
| 8нмол/Л | Стандартное Но.3 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.4 + 120μл |
| 4нмол/Л | Стандартное Но.2 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.3 + 120μл |
| 2нмол/Л | Стандартное Но.1 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.2 + 120μл |
| Стандартная концентрация | Стандартное Но.5 | Стандартное Но.4 | Стандартное Но.3 | Стандартное Но.2 | Стандартное Но.1 |
| 64нмол/Л | 32нмол/Л | 16нмол/Л | 8нмол/Л | 4нмол/Л | 2нмол/Л |
Мытье 20мл разбавленное буфером концентрата 30кс буфера мытья в деионизированный или дистиллированная вода для того чтобы произвести 500 мл буфера мытья 1кс. Если кристаллы формировали в концентрате, то смешивание нежно до тех пор пока кристаллы совершенно не растворят.
Процедура по Ассай
1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.
2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на 2-8°К.
3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное решение содержит биотинылатед антитело.
4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте анти--НЭОП антитело 10μл к колодцам образца, тогда добавьте стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам (колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.
5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья. Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30 секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья, переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные полотенца или другой абсорбент материал.
6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.
7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет изменит в желтый цвет немедленно.
8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10 менуэтов после добавления решения стопа.