Высокий набор каталазы ELISA крысы характерности для точного количественного обнаружения

96 набор колодцев ЭЛИСА для характерности КАТ высокой

Кат.Но Э0869Ра

Стандартный ряд кривой: 1нг/мл - 300нг/мл

Чувствительность: 0.52нг/мл

Размер: 96 колодцев

Хранение: Храните реагенты на 2-8°К. для хранения сверх 6 месяцев сошлитесь на срок годности держите его на циклах таяния -20°К. Авоид повторенных. Если индивидуальные реагенты раскрыты, то порекомендовано, чтобы набор был использован не позднее 1 месяц.

* этот продукт для пользы исследования только, не для пользы в процедурах по диагноза. Он сильно рекомендует прочитать эту инструкцию полностью перед использованием.

Предполагаемое использование

Этот набор сэндвича для точного количественного обнаружения каталазы крысы (также известной как КАТ) в сыворотке, плазме, супернатес культуры клетки, лысатес клетки, гомогенатах ткани.

Принцип Ассай

Этот набор Энзим-соединенный Ассай иммуносорбента (ЭЛИСА). Плита былапокрыта с антителом КАТ крысы. Добавляют и связывает КАТ представляет в образце к антителам покрытым на колодцах. И после этого биотинылатед антитело КАТ крысы добавлено и связывает к КАТ в образце. После этого Стрептавидин-ХРП добавлено и связывает к антителу КАТ Биотинылатед. После инкубации унбоунд Стрептавидин-ХРП помыто прочь во время моя шага. Решение субстрата после этого добавлено и цвет превращается в пропорции к количеству КАТ крысы. Реакция прекращена добавлением кислотного останавливает решение и абсорбансе измерен на 450 нм.

Собрание образца

Сыворотка позволяет сыворотке свернуться на 10-20 минут на комнатной температуре. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на 20 минут.

Плазма собирает плазму используя ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ или гепарин как противокоагулятор. Центрифугуйте образцы на 15 минут на 2000-3000 РПМ на 2 - 8°К не позднее 30 минут собрания.

Моча собирает стерильной трубкой. Центрифуга на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Собирая плеуроперитонеал жидкую и спинномозговую жидкость, пожалуйста следовать процедурами вышеупомянутыми.

Супернатант культуры клетки собирает стерильными трубками рассматривая сделайте компоненты секретным. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут. Соберите супернатанц осторожно. Рассматривая компоненты внутри клетка, используйте ПБС (пэ-аш 7.2-7.4) для того чтобы разбавить подвес клетки к концентрации клетки приблизительно 1 миллион/мл. Повредите клетки через повторенные циклы замораживани-таяния для того чтобы позволить вне внутренним компонентам. Центрифугуйте на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.

Ткани Ринсе ткани в ПБС (пэ-аш 7,4) для того чтобы извлечь сверхнормальную кровь тщательно и весить перед гомогенизацией. Семените ткани и гомогенизируйте их в ПБС (пХ7.4) с стеклянным гомогенизатором на льде. Растайте на 2-8°К или замерзните на центрифуге -20°К. на 2000-3000 РПМ на приблизительно 20 минут.

Процедура по Ассай

1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.

2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на 2-8°К.

3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное решение содержит биотинылатед антитело.

4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте антитело анти--КАТ 10μл к колодцам образца, тогда добавьте стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам (колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.

5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья. Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30 секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья, переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные полотенца или другой абсорбент материал.

6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.

7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет изменит в желтый цвет немедленно.

8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10 менуэтов после добавления решения стопа.

Сводка

1. Подготовьте все реагенты, образцы и стандарты.
2. Добавьте образец и реагент ЭЛИСА в каждое хорошо. Инкубируйте на 1 час на 37°К.

3. Помойте плиту 5 раз.

4. Добавьте решение а и Б. Инкубировать субстрата на 10 минут на 37°К.

5. Добавьте остановите решение и цвет превращается.

6. Прочитайте значение ОД не позднее 10 минут.

Ссылки

Ким К.Х., Х. Чои, Чун И.С., Ким Г.Т., парк ДЖ.В., Ким М.С.
Свод Пфлугерс. 442:519- 525(2001)