CO. Шанхая Korain Biotech, Ltd
Shanghai Korain Biotech Co Ltd
Add to Cart
Высокая мышь Сенситивие подгоняла бета-дефенсин 4 колодца набора 96 ДЭФБ4 ЭЛИСА
Кат.Но Э1204Мо
Стандартный ряд кривой: 0.05нг/мл - 10нг/мл
Чувствительность: 0.021нг/мл
Размер: 96 колодцев
Хранение: Храните реагенты на 2-8°К. для хранения сверх 6 месяцев сошлитесь на срок годности держите его на циклах таяния -20°К. Авоид повторенных. Если индивидуальные реагенты раскрыты, то порекомендовано, чтобы набор был использован не позднее 1 месяц.
* этот продукт для пользы исследования только, не для пользы в процедурах по диагноза. Он сильно рекомендует прочитать эту инструкцию полностью перед использованием.
Предполагаемое использование
Этот набор сэндвича для точного количественного обнаружения мыши бета-дефенсин 4 (также как ДЭФБ4) в сыворотке, плазме, супернатес культуры клетки, лысатес клетки, гомогенатах ткани.
Принцип Ассай
Этот набор Энзим-соединенный Ассай иммуносорбента (ЭЛИСА). Плита былапокрыта с антителом мыши ДЭФБ4. ДЭФБ4 представляют в образце добавлены и связывают к антителам покрытым на колодцах. И после этого биотинылатед антитело мыши ДЭФБ4 добавлено и связывает к ДЭФБ4 в образце. После этого Стрептавидин-ХРП добавлено и связывает к антителу Биотинылатед ДЭФБ4. После инкубации унбоунд Стрептавидин-ХРП помыто прочь во время моя шага. Решение субстрата после этого добавлено и цвет превращается в пропорции к количеству мыши ДЭФБ4. Реакция прекращена добавлением кислотного останавливает решение и абсорбансе измерен на 450 нм.
Подготовка реагента
Все реагенты должны быть принесены к комнатной температуре перед использованием.
Стандарт воспроизводит 120μл стандарта (12.8нг/мл) с 120μл стандартного разжижителя для генерации запасного раствора стандарта 6.4нг/мл. Позвольте стандарту сидеть на 15 минут с нежным взволнованием до делать разбавления. Подготовьте двойные стандартные пункты серийно разбавлять 1:2 стандартного запасного раствора (6.4нг/мл) с стандартным разжижителем для произведения решений 3.2нг/мл, 1.6нг/мл, 0.8нг/мл и 0.4нг/мл. Стандартный разжижитель служит как зеро стандарт (0 нг/мл). Любое остальное решение должно замерзнуться на -20°К и использоваться не позднее один месяц. Разбавление стандартных предложенных решений следующим образом:
| 6.4нг/мл | Стандартное Но.5 | первоначальный разжижитель стандарта 120μл + стандарта 120μл |
| 3.2нг/мл | Стандартное Но.4 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.5 + 120μл |
| 1.6нг/мл | Стандартное Но.3 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.4 + 120μл |
| 0.8нг/мл | Стандартное Но.2 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.3 + 120μл |
| 0.4нг/мл | Стандартное Но.1 | 120μл стандартное разжижитель стандарта Но.2 + 120μл |
| Стандартная концентрация | Стандартное Но.5 | Стандартное Но.4 | Стандартное Но.3 | Стандартное Но.2 | Стандартное Но.1 |
| 12.8нг/мл | 6.4нг/мл | 3.2нг/мл | 1.6нг/мл | 0.8нг/мл | 0.4нг/мл |
Мытье 20мл разбавленное буфером концентрата 30кс буфера мытья в деионизированный или дистиллированная вода для того чтобы произвести 500 мл буфера мытья 1кс. Если кристаллы формировали в концентрате, то смешивание нежно до тех пор пока кристаллы совершенно не растворят.
Процедура по Ассай
1. Подготовьте все реагенты, стандартные решения и образцы как проинструктировано. Принесите все реагенты к комнатной температуре перед использованием. Ассай выполнен на комнатной температуре.
2. Определите число прокладок требуемых для ассай. Введите прокладки в рамки для пользы. Неиспользованные прокладки следует сохранить на 2-8°К.
3. Добавьте стандарт 50μл к стандарту хорошо. Примечание: Не добавьте антитело к стандарту хорошо потому что стандартное решение содержит биотинылатед антитело.
4. Добавьте образец 40μл к колодцам образца и после этого добавьте антитело 10μл анти-ДЭФБ4 к колодцам образца, тогда добавьте стрептавидин-ХРП 50μл к колодцам образца и стандартным колодцам (колодцу пустого контроля). Смешайте хорошо. Покройте плиту с уплотнителем. Инкубируйте 60 минут на 37°К.
5. Извлеките уплотнитель и помойте плиту 5 раз с буфером мытья. Выдержите колодцы с по крайней мере буфером мытья 0,35 мл на 30 секунд к 1 минута для каждого Вашингтона. Для автоматизированной стирки, аспирируйте все колодцы и помойте 5 раз с буфером мытья, переполняя подмимает с буфером мытья. Закрывайте плиту на бумажные полотенца или другой абсорбент материал.
6. Добавьте решение а субстрата 50μл к каждому колодец и после этого добавьте решение б субстрата 50μл к каждому хорошо. Инкубируйте плиту покрытую с новым уплотнителем на 10 минут на 37°К в темноте.
7. Добавьте 50μл остановите решение к каждому хорошо, голубой цвет изменит в желтый цвет немедленно.
8. Определите оптически плотность (значение ОД) каждого колодец немедленно используя набор читателя микроплате до 450 нм внутри 10 менуэтов после добавления решения стопа.
Ссылки
Колар С.С., Х. Байдоури, Ханьлон С., МкДермотт А.М.
Заразите. Иммун. 81:2669- 2677(2013)